細(xì)胞培養(yǎng)基不僅為細(xì)胞提供必要的營養(yǎng)物質(zhì),還為細(xì)胞的生長和繁殖提供適宜的環(huán)境。在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,選擇合適的培養(yǎng)基是養(yǎng)好細(xì)胞的第一步。
本期細(xì)胞學(xué)堂將為大家詳細(xì)介紹一些特殊的培養(yǎng)基,以及選用時(shí)的相關(guān)指標(biāo),幫助您快速上手選擇合適的培養(yǎng)基,以滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。
常見細(xì)胞培養(yǎng)基可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、完-全培養(yǎng)基和無血清細(xì)胞培養(yǎng)基三類。
在去年發(fā)布的干貨中,我們詳細(xì)介紹了關(guān)于MEM、DMEM、RPMI 1640、無血清培養(yǎng)基等常見培養(yǎng)基,感興趣的可以回顧下。
基礎(chǔ)培養(yǎng)基主要是指未添加血清的合成培養(yǎng)基以及一些專為特定原代細(xì)胞設(shè)計(jì)的專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
無血清培養(yǎng)基是指通過添加已知成分的組分(如轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白、胰島素等)替代血清,用于特定細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
完-全培養(yǎng)基是指在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加了血清的培養(yǎng)基,可能還含有一些特殊的細(xì)胞生長因子、抗生素(如雙抗)等。
特殊細(xì)胞培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基,通常需要搭配血清或者血清替代物來配制成完-全培養(yǎng)基后使用。
由Glen Fischer在美國國家癌癥研究所設(shè)計(jì)研制,最初用于小鼠白血病細(xì)胞的培養(yǎng),現(xiàn)主要用于造血細(xì)胞的培養(yǎng),如淋巴母細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。
該培養(yǎng)基含有多種細(xì)胞生長所需的氨基酸、維生素以及無機(jī)鹽等成分,不含蛋白質(zhì)、脂類或任何外源性生長因子。
由William和Gunn共同研制,主要用于大鼠肝上皮細(xì)胞的培養(yǎng),也可用于其他哺乳動(dòng)物的肝細(xì)胞培養(yǎng)。
該培養(yǎng)基含有多種細(xì)胞生長所需的氨基酸、維生素以及無機(jī)鹽等成分,不含蛋白質(zhì)、脂類或任何外源性生長因子,可以根據(jù)研究需要來調(diào)整L-谷氨酰胺的用量,在使用時(shí)添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細(xì)胞的生長與增殖。
MCDB是為特定細(xì)胞設(shè)計(jì)的低蛋白和無血清培養(yǎng)的培養(yǎng)基,MCDB 131是MCDB培養(yǎng)基的一種,是由Knedler和Ham設(shè)計(jì)開發(fā)出來的,最初用于培養(yǎng)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMVEC)。隨著深入的研究,MCDB 131培養(yǎng)基除用于內(nèi)皮細(xì)胞外,還可用于包括肝細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞類型。
MCDB 131培養(yǎng)基不同于傳統(tǒng)培養(yǎng)基之處在于,其含有微量元素、腐胺、腺嘌呤、胸腺嘧啶以及更高濃度的氨基酸和維生素。該培養(yǎng)基在使用時(shí)常與表皮生長因子(EGF)、氫化可的松、谷氨酰胺以及低濃度血清搭配使用,血清的添加濃度需根據(jù)細(xì)胞類型而定。
Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基,是一種經(jīng)過改良的最-低必需培養(yǎng)基,可以在減少50%常規(guī)血清用量的情況下,維持細(xì)胞的正常增殖。這一特性使其在細(xì)胞轉(zhuǎn)染等實(shí)驗(yàn)操作中尤為適用。
01
糖的濃度
高糖培養(yǎng)基通常適合高代謝率及高密度細(xì)胞的培養(yǎng)。
02
酚紅
酚紅是一種酸堿指示劑,用于輔助判斷試劑的pH值變化。酸性環(huán)境下偏黃色,堿性環(huán)境下偏紫色。
03
GlutaMAX
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,是L-谷氨酰胺的升級版本。L-谷氨酰胺在溶液中容易降解,但L-丙氨酰-L-谷氨酰胺具有良好的穩(wěn)定性,可以作為L-谷氨酰胺的替代物。
04
鈣、鎂離子
鈣、鎂離子在細(xì)胞培養(yǎng)中有助于細(xì)胞彼此相連,增強(qiáng)細(xì)胞的黏附性,培養(yǎng)懸浮細(xì)胞可選擇無鈣鎂離子的培養(yǎng)基。
以上是關(guān)特殊細(xì)胞培養(yǎng)基及選用指標(biāo)的介紹,更多細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)干貨,請持續(xù)關(guān)注細(xì)胞學(xué)堂專欄~