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細胞學堂 | 培養(yǎng)B16系列細胞必看知識點

更新時間：2023-11-28  |  點擊率：1565
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B16系列細胞屬于小鼠黑色素瘤細胞系，是源自C57小鼠的一種皮膚癌細胞，常用于腫瘤生物學研究。





本期細胞學堂為大家整理了B16系列細胞的培養(yǎng)方法與注意事項，B16細胞黑色素的形成原因及解決方法，幫助您快速上手開展實驗。






01


B16系列細胞培養(yǎng)方法 

培養(yǎng)條件




RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)；




生長特性




貼壁生長，生長迅速，能產生黑色素；




傳代方式




0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化2-3min，推薦傳代比例1:3-1:4；




凍存




推薦凍存密度1-5×106cell/ml。




注意事項


（1）細胞生長速度快，培養(yǎng)密度不宜過高，需要及時傳代和換液，細胞密度過高，會導致細胞狀態(tài)變差，死亡；

（2）細胞內含黑色素，在細胞會產生黑色素，遇到培養(yǎng)基顏色變深，消化下來的細胞離心后，沉淀為黑褐色或者是灰黑色，此為正?，F(xiàn)象。


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復蘇時細胞沉淀顏色:“灰黑色"（1640培養(yǎng)基）


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細胞產黑色素導致培養(yǎng)基變色（1640培養(yǎng)基）


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細胞產黑色素導致培養(yǎng)基變色（DMEM培養(yǎng)基）





02


黑色素形成原因 


該細胞在體外培養(yǎng)有兩種培養(yǎng)條件：快速分裂增殖和分化成熟，培養(yǎng)基條件不同可改變該細胞的生長狀態(tài)，使用RPMI-1640培養(yǎng)基可使其快速增殖，而使用DMEM培養(yǎng)基能誘導細胞分化成熟并合成黑色素。建議正常擴增凍存請使用RPMI-1640培養(yǎng)基，若需要進行分泌黑色素等后續(xù)相關實驗，可以在擴增凍存細胞后更換為DMEM培養(yǎng)來滿足實驗設計。

需要注意的是，B16細胞對培養(yǎng)基條件較為敏感，同樣是DMEM或RPMI-1640培養(yǎng)基，不同型號、不同廠家的產品，其具體成分的少許差異都有可能改變B16系列細胞的生長狀態(tài)。在實驗時應慎重選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)時最好是保持和購買細胞的廠家同一型號的培養(yǎng)基，以保證細胞的性狀穩(wěn)定。


更換培養(yǎng)條件，比如由RPMI-1640更換成DMEM會導致黑色素大量形成，細胞培養(yǎng)基變黑，但若穩(wěn)定培養(yǎng)時未更換培養(yǎng)基，出現(xiàn)培養(yǎng)基突然變黑的情況，有可能是以下幾個原因引起的：

1

細胞死亡

如果細胞在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)大量細胞死亡，細胞的代謝產物和細胞碎片可能會導致培養(yǎng)基變黑。這可能是由于細胞因狀態(tài)變差、污染或其他因素引起的。

解決方法：

觀察細胞狀態(tài)，確保細胞的生長條件和培養(yǎng)基正確。如果發(fā)現(xiàn)細胞死亡過多，需要重新復蘇細胞。

2

細胞污染

如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)污染（細菌、真菌、支原體、黑膠蟲等），這些微生物的生長和代謝產物可能導致培養(yǎng)基變黑。

解決方法：

排查污染源，檢查培養(yǎng)環(huán)境，使用的試劑、耗材，注意無菌操作。如果遇到污染情況，應立即更換培養(yǎng)基，進行無菌處理并消除污染源。




03


客戶B16-F10細胞實驗經驗分享

(以下為客戶實戰(zhàn)經驗分享，僅做參考)

01

為了保證B16-F10細胞的活性，通常在傳代時盡可能控制胰酶的溫度及消化時間，關注B16-F10細胞的消化狀態(tài)（顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓，側立培養(yǎng)瓶細胞可以滑落時可終止消化）。消化過度導致B16-F10細胞損傷、活性下降。尤其是在進行黑色素合成、分泌和酪氨酸酶活性等相關實驗時，更需注意胰酶的消化時間，細胞的消化狀態(tài)。

02

使用光線對B16-F10細胞進行輻照處理時，有兩點值得關注的地方：

（1）光照時須打開培養(yǎng)皿蓋，以確保光線照射在B16-F10細胞上，而非被培養(yǎng)皿蓋折射與吸收；

（2）輻照前，需要將培養(yǎng)基換成無酚紅的RPMI-1640完-全培養(yǎng)基。避免酚紅對光線的吸收作用，影響試驗結果。




04


B16系列細胞的常見應用


1

黑色素瘤生物學研究

B16細胞系可以用于黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移機制的研究。通過模擬黑色素瘤細胞在體內的行為，探索細胞增殖、遷移、侵襲、轉移等過程。

2

腫瘤藥物篩選

B16細胞在體外培養(yǎng)中可以用于篩選和評估抗黑色素瘤藥物的療效。通過將藥物添加到培養(yǎng)基中，研究藥物對細胞增殖、凋亡、侵襲、轉移等生物學行為的影響，以評估其抗腫瘤活性。

3

免疫治療研究


B16細胞可以用作免疫治療研究的模型。例如，可以將免疫刺激劑或免疫檢查點抑制劑添加到培養(yǎng)基中，研究它們對細胞免疫應答和腫瘤生長的影響，以評估其在黑色素瘤治療中的潛力。

4

黑色素瘤轉移研究

B16細胞的轉移能力是其研究的重要方面。可以通過將細胞注射到小鼠的血液循環(huán)或特定的器官中，研究黑色素瘤細胞的遷移和轉移機制，以及針對轉移的治療策略。

5

細胞信號傳導研究

B16細胞可以用于研究細胞信號傳導通路在黑色素瘤發(fā)生和發(fā)展中的作用。例如，可以通過轉染或抑制特定的信號分子或途徑，研究其對細胞增殖、凋亡、侵襲等生物學行為的影響。

注意：

B16系列細胞雖然在黑色素瘤研究中被廣泛使用，但其在體外培養(yǎng)中仍然存在一些局限性，如與體內環(huán)境的差異、細胞株的異質性等。因此，在研究中需要綜合使用其他模型和方法，以更好地模擬和了解黑色素瘤的生物學特性。





●參考文獻●

[1]Bae, J. S., Han, M., Yao, C.,et al. Chaetocin inhibits IBMX-induced melanogenesis in B16F10 mouse melanoma cells through activation of ERK. Chemico-biological interactions,2016,245, 66–71. 

[2]陳金妹,林進妹,黃家福等.培養(yǎng)基誘導B16細胞黑色素合成及機理研究[J].閩南師范大學學報(自然科學版),2016,29(2):87-97.DOI:10.16007/j。cnki.issn2095-7122.2016.02.014.

[3]Costantino, V. V., Lobos-Gonzalez, L., Iba?ez, J.,et al.Dehydroleucodine inhibits tumor growth in a preclinical melanoma model by inducing cell cycle arrest, senescence and apoptosis. Cancer letters,2016,372(1),10–23.

[4]Chen, J. H., Chang, J. L., Chen, P. R.,et al. Inhibition of peroxisome proliferator-activated receptor gamma prevents the melanogenesis in murine B16/F10 melanoma cells. BioMed research international, 2014, 695797. 




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