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細(xì)胞學(xué)堂 | RAW 264.7誘導(dǎo)極化及鑒定大全

更新時(shí)間：2023-02-03  |  點(diǎn)擊率：2159

RAW 264.7（小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞）是破骨細(xì)胞、炎癥研究最-常用的體外模型之一，被廣泛用于研究風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)溶解、牙周炎等骨骼疾病。


極化方式


巨噬細(xì)胞是具有異質(zhì)性的一類免疫細(xì)胞，在體內(nèi)外不同環(huán)境影響下可極化為不同表型參與機(jī)體生理、病理反應(yīng)。從激活方式上分為經(jīng)典激活的巨噬細(xì)胞M1和選擇性激活的巨噬細(xì)胞M2。


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M1型分化

細(xì)菌和脂多糖（LPS）可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型分化，產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，抵抗病原入侵，但也會(huì)造成機(jī)體損傷，在實(shí)驗(yàn)中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時(shí)誘導(dǎo)其極化；


640.png

圖1. a.RAW 264.7 未分化形態(tài)圖 b.RAW 264.7 M1型分化形態(tài)圖




2

M2型分化

白細(xì)胞介素（IL-4）可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化，分泌抗炎細(xì)胞因子，并在組織修復(fù)與重建和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用，在實(shí)驗(yàn)中可采用10ng/mL IL-4作用12小時(shí)誘導(dǎo)其極化。


圖2. RAW 264.7 不同分型形態(tài)圖



鑒定方法


M1、M2具有各自特征性標(biāo)志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常見的M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志分子，IL-10、Arg-1、CD206是常見的M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志分子。一般在實(shí)驗(yàn)研究中：

1

WB可以分析RAW264.7細(xì)胞iNOS、YM-1和Arg-1的表達(dá)水平（如圖3）；


圖3. WB分析照射對(duì)IL-4誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞YM-1和Arg-1的表達(dá)影響

2

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）可以分析RAW264.7細(xì)胞表面CD86和CD206的表達(dá)（如圖4）；


640 (2).png

圖4. 流式細(xì)胞術(shù)分析照射對(duì)IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細(xì)胞CD206和CD209的表達(dá)

3

實(shí)時(shí)定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細(xì)胞因子的表達(dá)及分泌(如圖5）；


640 (3).png

圖5. 用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物序列

4

Griess reagent 可以分析細(xì)胞培養(yǎng)上清 NO 生成（如圖6）。


圖6. 不同樣品對(duì)RAW 264.7中NO產(chǎn)生的影響


參考文獻(xiàn)


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